淋巴細胞分離液是一種根據(jù)細胞密度差異，借助離心產(chǎn)生的重力加速度，進行細胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細胞分離液有Ficoll淋巴細胞分離液、Percoll淋巴細胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個核細胞的方法均為密度梯度離心法。淋巴細胞分離液是由聚蔗糖、泛影酸葡甲胺、氫氧化鈉等配制成水溶液，經(jīng)滅菌而成。用于分離全血中淋巴細胞。實驗室常用的是用于分離人的淋巴細胞的試劑，如果需要分離其他動物如小鼠的淋巴細胞，也有專門的淋巴細胞分離液。
用淋巴細胞分離液分離人組織中的單個核細胞方法：
1．取外科分離的各種組織，用含1％慶大霉素和1％小牛血清的MEM培養(yǎng)液洗滌組織塊，洗去可能的污染物。將組織塊置培養(yǎng)皿中，加入約為組織塊體積5~10倍的同樣MEM培養(yǎng)液。用無菌外科剪刀將組織塊剪碎成0.5mm3大小。
2．將組織塊轉(zhuǎn)移到小培養(yǎng)瓶中，靜置片刻，吸去培養(yǎng)液。加入約2倍組織塊體積的、濾過除菌的酶溶液。37℃水浴搖床中消化1～2小時，注意組織塊的消化程度。
3．當組織塊消化分散后，用手用力搖晃培養(yǎng)瓶3～5分鐘或用大口吸管反復(fù)吹打，使細胞團進一步分散。加入30ml上述MEM培養(yǎng)液，終止酶反應(yīng)。
4．讓上述懸液通過200目的金屬網(wǎng)或尼龍網(wǎng)，分離單個細胞。用上述MEM培養(yǎng)液洗滌細胞3次，每次離心1000×g 10分鐘。用1％臺盼藍染色法檢測細胞活力并計數(shù)細胞。
5．如果細胞量較多（>107），應(yīng)當用上述淋巴細胞分離液分離出單個核細胞，并用含10％小牛血清的細胞培養(yǎng)液將細胞配成適當濃度。
執(zhí)照.jpg)
